一、扩增子

1. 组织样本

1.1 植物组织>0.5g,成熟组织部位,例如植物根、茎、种子等部位建议2倍以上

1.2 动物组织>0.3g,核酸不丰富部位,例如脂肪、成熟皮肤、骨头等部位建议增加采样量

1.3 动物血液(哺乳类)>1mL;动物血液(红细胞有核类)> 0.5mL,血清血浆需酌情增加采样量

1.4 唾液>4mL

1.5 菌液(对数生长期)>4mL;菌体:对应菌液离心后菌沉淀30-50µL;真菌菌丝>0.5g

1.6 土壤:固体2g,液体2mL

1.7 粪便、肠道内容物、食糜≥1mL(离心管刻度);瘤胃液>2mL

1.8 水体(滤膜):直径4cm,滤膜3张,如果菌群丰度较低,建议增加采样量

1.9 拭子>4个,拭子表面有明显颜色变化,达到富集微生物的目的

2. 核酸样本

PCR-free文库 浓度>24ng/μl, 体积在50μl~120μl,总量 >150ng 

二、宏基因组

1. 组织样本

1.1 土壤/污泥/沉积物/腐殖质:≥5ml(离心管刻度)或≥3g;建议使用5mlEP或15ml、50ml离心管进行装载,并用封口膜封口,使用自封袋容易撒漏导致样品交叉污染

1.2 粪便、肠道内容物≥2mL、食糜≥4mL(离心管刻度)或≥2g;

1.3 瘤胃液/发酵液/组织液/冲洗液(离心有明显沉淀)3-5ml或沉淀≥1 g

1.4 水体、空气滤膜:直径4cm,滤膜3张(有明显颜色沉淀在滤膜上)

1.5 拭子:5-10个;无菌拭子反复擦拭,拭子表面有肉眼可见变化,对于较干燥的表面,可用生理盐水浸湿拭子后擦拭,以采取更多的微生物

2. 核酸样本

宏基因组文库:浓度>24ng/μl, 体积在20μl~120μl,总量 > 400ng。

三、单菌(真菌、细菌)

1. 组织样本

1.1 样本量:菌体≥2g,-80℃保存,干冰运输

1.2 样本准备:对数期4ml菌液,4000×g离心10min(4℃),弃上清,沉淀(对应菌液离心)用无菌水洗2次后干冰运输。

1.3 甘油保存的样本,需要重新液体培养基(例如 LB)活化到对数期。

1.4 真菌(>0.5g)大型菇类等,建议运输菌丝,不建议运输孢子或是子实体,杂合率较高,不利于组装

1.5 样本一定为非灭活样本,灭活会导致核酸严重降解

2. 核酸样本

DNA 小片段文库:浓度>24ng/μl,体积在20μl~120μl,总量>400ng 。