一、采样建议

1. 组织类样本

样本类型采样量样本保存和运输注意事项
新鲜动物组织≥500mg将组织放入旋盖冻存管中密封好，迅速置于液氮中速冻，-80℃保存，干冰运输取相应部位组织，尽量将组织切成1cm2左右的小组织块
新鲜植物组织≥800mg

2. 粪便类样本

样本类型采样量样本保存和运输注意事项
粪便 ≥1g建议3g 将挖取的粪便放入采样管中，密封好，液氮速冻，-80℃保存，干冰运输 受试者尽量避免有疾病（肠道炎症、癌症等）史，避免有手术等医疗干预

处理方法：用采样管中无菌勺挖去粪便中段（基本不接触空气等其他媒介）的部分（3-5g），小鼠粪便至少在3-5粒；

3. 其他样本


样本类型 采样量
total RNA浓度：≥ 50ng/μL

体积：20μL ≤ V ≤ 120μL

总量：≥ 1μL

菌体/菌丝 

≥ 1*107 个

≥ 0.5

肠道内容物 0.5-1g
活性污泥/淤泥/沉积物类10-15mL（约4-5g沉降物）
土壤≥ 2g（建议富集菌体沉淀)

肠道内容物类处理方法：

（1）实验对象死亡后，无菌解剖刀于无菌环境中取出整个肠道，选择切取所需肠段（如回肠、结肠、盲肠等）；

（2）无菌手术刀挖取内容物置于无菌离心管中，液氮速冻至少4h以上，后与-80℃保存。

注意：一般单个样本500-1000mg/管内容物。为保证实验顺利进行，尽可能多采集保存样品。

活性污泥/淤泥/沉积物类：

1）从活性污泥装置中取至少10-15ml的活性污泥样本（约4-5g沉降物）；或者取距离水底/地表0-10cm的沉积物约5-10g；

2）保存在无菌离心管中，液氮速冻并放置于-80℃保存。

3）RNA提取。液氮速冻。

土壤：

（1）土壤样本低温环境（2-8℃）运送至实验室，先2mm筛网过筛，取5-10g保存于无菌离心管中，用RNAlater浸泡，保证全部浸泡在RNAlater中，4℃过夜孵育，随后高速离心去除RNAlater，-80℃保存；

（2）土壤样本细菌含量比较低，或含有大块砂石，可先加入无核酸酶的生理盐水或1×PBS，匀浆，自然沉降或低速离心（≤100g，1-2min），吸取上层浑浊液体，放入新的1.5ml或2ml离心管，高速离心（≥8000g10min）弃上清，取沉淀后，再用RNAlater处理。

（3）提取RNA，液氮速冻，-80℃保存。

注意：样本准备过程中所用的离心管必须是无菌无RNA酶的离心管；保存用到RNAlater进行备注，尽量不要冻结，4℃过夜后，需高速离心去除RNAlater才可冷冻；RNAlater使用量：500mg土壤加1-1.5mlRNAlater，充分混匀。

二、注意事项

（1）宿主类、环境类样本建议至少10G数据量；粪便类5G数据量；

（2）建议新鲜样本；选取微生物含量较多的部分；

（3）备注样本类型、物种、部位、样本量、保存时间；

（4）组织类样本切记不可反复冻融。反复冻融样本不建议测序；样本存放时间：-80℃不超过3个月；

（5）陈皮等类似样本无法做宏转录组。

三、样本打包

1. 样本的打包

（1）核酸样品建议使用质量好的1.5ml或2ml 低吸附EP管装载样品，并用封口膜封口。为了防止样品管破裂，或者污染和混乱，请不要使用诸如PCR管、0.5ml EP管、八联管、96孔板、深孔板等非标准管采样。

（2）组织样本建议根据采样量使用合适规格带螺纹帽的EP管、冻存管或者离心管装载组织样品，并用封口膜封口。

（3）为防止样品管在运输过程中受到干冰挤压破裂，最好将样品管放到50ml离心管或其他支撑物中，并在支撑物里添加棉花或卫生纸缓冲。大量样品建议将EP管放置在冻存盒中，并在冻存盒外面包裹气泡垫。如使用锡箔纸、自封袋装载的样品，为防止运输中受挤压破损，建议将锡箔纸折叠整齐装在自封袋中，在样品包装外再用气泡垫包好并固定。

（4）对于血液样品，建议采用5-10ml 塑料抗凝采血管装载，为了防止运输过程中采血管因挤压而损坏，需要将每支采血管管身均用气泡垫包好，然后放置到塑料或纸质包装盒中。

（5）用乙醇沉淀的样品由于运输中会有少量乙醇挥发出，建议将样品管盖用封口膜缠绕4-5圈。

2. 样本的名称标识

（1）所有的样品必须具有清晰的标记，并且简洁明了。

（2）使用锡箔纸包装的组织样品建议在锡箔纸内外均标记样品名称，并将锡箔纸放在自封袋中，自封袋外面再标记上样品名称，防止锡箔纸上样品名称模糊引起样品混乱。

（3）使用乙醇沉淀的核酸样品，由于挥发出的乙醇会使记号笔的标记模糊，建议用油性记号笔将样品名称写在标签纸上，然后用透明胶带将标签纸粘贴在样品管壁上，并缠绕2-3圈。

（4）样品名称建议使用“字母+数字”命名方式标注在管盖。其他信息如日期、浓度、物种等可标注在管壁。所有标注内容需与《样品信息单》保持一致。