ATAC-seq

常量ATAC：>50万/份

微量ATAC：>1万/份

细胞复苏后活性大于80%，一份备份

常量ATAC：>10万/份

微量ATAC：>5千/份

活性大于80%

（1）取出贴壁细胞，显微镜下观察，确定生长状态是否良好，是否有细菌污染。

（2）吸掉培养基，向细胞培养瓶/皿中加入1×PBS（根据培养器皿调整PBS用量），洗2次。

（3）弃尽PBS，加入适量胰酶放回37℃培养箱中消化，利用完全培养基终止反应。

（4）加入500μl 1×PBS洗涤，4°C，500g离心5min，小心吸掉全部上清。

（5）用冻存液（60%完全培养基+30%FBS+10%DMSO）（百分比指体积比）重悬细胞沉淀，按照建议采样量分装，移至冻存管（提前配置细胞冻存液且置于冰上预冷，防止新配置的冻存液过热损伤细胞，待冻存液恢复室温后使用）。

（6）将冻存管置于程序降温冻存盒，于-80℃冰箱梯度降温并暂时保存（请严格按照程序降温来操作，对细胞造成的损伤最小）。24h后，请将程序降温盒中的细胞样本转移至液氮中保存。若没有程序降温冻存盒，建议使用人工传统降温方法：冻存管置于4℃ 10min→-20℃ 30min→-80℃ 16-18h（或过夜，最长放置不超过一个月）→转移至液氮长期储存。

注意：由于细胞复苏后需活细胞数大于5万，因此冻存细胞量至少超出10倍（50W左右，若针对特殊细胞则应加大细胞量）。

（1）确定生长状态良好且无污染；

（2）吸掉培养基，加入适量 1×PBS（体系中不可含 Mg2+和 Ca2+）洗 2 次，吸尽培养基；

（3）小心吸除 PBS，加入适量胰酶，37℃培养箱中消化，消化时间和方式请根据细胞类型进行调整，以显微镜下观察细胞是否分散作为调整标准；

（4）加入 5 mL 含血清的完全培养基终止消化，用吸管轻轻地吹下贴壁细胞，500×g 离心 5 min， 小心去上清；

（5）加入 1×PBS 清洗一次，4℃ 500×g 离心 5 min，弃上清；

（6）用 1 ml 以上的培养基/血清重悬细胞沉淀，转移至 2 ml 离心管中，用 parafilm 对离心管进行密封。

>常量ATAC：>50万/份

微量ATAC：>1万/份

细胞复苏后活性大于80%

>常量ATAC：>10万/份

微量ATAC：>5千/份

活性大于80%

（1）取出悬浮细胞于显微镜下观察，确定培养细胞生长状态是否良好，是否有细菌污染。

（2）收集细胞，吸掉全部上清，加入500µl 1×PBS洗涤，4°C 500g离心5min，小心弃上清。

（3）用冻存液（60%完全培养基+30%FBS+10%DMSO）（百分比指体积比）重悬细胞沉淀，分装细胞，移至冻存管（请提前配置细胞冻存液，防止新配置的冻存液过热损伤细胞，待冻存液恢复室温后使用）。

（4）将冻存管置于程序降温冻存盒，于-80℃冰箱梯度降温并暂时保存。24h后，请将程序降温盒中的细胞样本转移至液氮中保存。若没有程序降温冻存盒，建议使用人工传统降温方法：冻存管置于4℃ 10min→-20℃ 30min→-80℃ 16-18h（或过夜，最长放置不超过一个月）→转移至液氮长期储存。

注意：由于细胞复苏后需活细胞数大于5万，因此冻存细胞量至少超出10倍（50W左右，若针对特殊细胞则应加大细胞量）。

（1）确定细胞生长状态良好且无污染；

（2）进行细胞计数，每样本取10万/5千个细胞以上，细胞悬液 4℃ 500×g 离心 5 min，小心去上清，离心条件可根据细胞类型进行调整；

（3）加入 1 mL 1×PBS 重悬细胞沉淀，清洗一次，4℃ 500×g 离心 5 min，小心弃上清；

（4）用 1 ml 以上的培养基/血清重悬细胞沉淀，转移至 2 ml 离心管中，用 parafilm 对离心管进行密封。

（1）取下新鲜组织，立即剔除结缔组织和脂肪等杂质。

（2）将组织转移至新离心管中，用预冷的PBS溶液漂洗至将组织表面的残留血液冲洗干净。

（3）将冲洗干净的组织样本取出并用无尘纸擦干水分，若组织体积较大，应在冰上将组织切成小块或薄片（每份约50mg），之后置于2ml旋盖冻存管内，准备标记样本名称。

（4）迅速置于液氮中冷冻30min，然后转移至-80℃冰箱中保存。

植物组织处理方法：

（1）从植物体上取下新鲜组织，后用清水将材料表面的灰尘或泥土冲洗干净，吸干。

（2）如果组织体积较大，应在冰上将组织切成小块或薄片，然后放入2ml或更大体积的旋盖冻存管中，每份>300mg，准备标记样本名称。

（3）立即浸入液氮中速冻30min，之后保存于-80℃冰箱。