甲基化_科淘

一、WGBS（全基因组甲基化）

1. 植物样本

（1）植物组织样本采样量不低于0.2g

采集样品时建议采用易提取、核酸含量高的植株幼嫩叶片，离体后迅速进行生理盐水漂洗，用无尘纸擦干表面水分，冰上分割50-100mg每个小块，液氮速冻，-80℃保存，不要使用RNAlatter、TRIzol、酒精保存。明确标识、安全密封、干冰运输

（2）根、茎、叶、果实等组织较大时，建议切段或切碎

（3）样品数目较多或样量较多时，建议分袋、分管采样，便于取样

（4）用锡箔纸时，折叠要有可寻的纹理，避免提取样品时样品散落，样品信息标注于可视位置

2. 动物样本

2.1 常规样本

（1）动物组织样本采样量不低于0.1g

（2）选用新鲜的样本，离体后迅速进行生理盐水漂洗，剔除结缔组织等非研究组织，用无尘纸擦干表面水分，冰上分割50-100mg每个小块，液氮速冻，-80℃保存，不要使用RNAlatter、TRIzol、酒精保存。明确标识、安全密封、干冰运输

（3）采样时将样品分为小块，有备份时分管

（4）采样前，样品做好相应处理，如去皮、去毛等，软骨样品尽量切碎

（5）个体较小样品（蚊、螨等），一次提取的样品放在一个EP管中，避免分管运输

（6 ）在动物组织样本中，若主要研究的是某一器官的甲基化水平，最好针对该器官进行取样，注意选取处理组和对照组样本

【注】需用新鲜组织或取自新鲜组织的 DNA，石蜡包埋、甲醛固定、乙醇、乙酸处理过的样品建议不要做 WGBS

2.2 血液样本

（1）哺乳类动物血液不低于2ml

（2）红细胞有核类动物血液不低1ml

（3）保存到EDTA管中，液氮速冻，-80℃保存，不要使用RNAlatter、TRIzol、酒精保存

（4）cfDNA因其自身长度特点，经过亚硫酸盐的处理后，长度会进一步降低，某些指标相对常规 DNA 样本较弱。例如 Duplication 和比对率等，因此此样本只能进行风险建库

【注】由于血液样本不具有组织特异性的特点，在针对某些特异疾病或癌症的研究时，相较于组织样本来说，可能筛选到的差异DMR较少，特异性差，研究针对性弱。若选择血液样本进行甲基化研究，患者及健康人样本均需要选取血液样本，不建议将其与组织样本进行对照研究

2.3 细胞样本

（1）细胞样本不低于>1*10⁶个

（2）低温离心悬浮细胞（贴壁细胞需要先消化处理），用PBS缓冲液将细胞快速洗一次，然后离心沉淀，液氮速冻，-80℃保存，不要使用RNAlatter、TRIzol、酒精保存。明确标识、安全密封、干冰运输

3. 核酸样本

浓度>24ng/μl，体积在20μl~120μl，总量>400ng。

二、RRBS（简化甲基化）

1. 动物样本

1.1 常规样本

（1）动物组织样本采样量不低于0.5g

（3）将样品分为小块，有备份时分管

（4）样品做好相应处理，如去皮、去毛等，软骨样品尽量切碎

（5）在动物组织样本中，若主要研究的是某一器官的甲基化水平，最好针对该器官进行取样，注意选取处理组和对照组样本

【注】需用新鲜组织或取自新鲜组织的DNA，石蜡包埋、甲醛固定、乙醇、乙酸处理过的样品建议不要做RRBS

1.2 血液样本

（1）哺乳类动物血液不低于 2ml

（2）保存到 EDTA 管中，液氮速冻，-80℃保存，不要使用 RNAlatter 、TRIzol 、酒精保存

【注】由于血液样本不具有组织特异性的特点，在针对某些特异疾病或癌症的研究时，相较于组织样本来说，可能筛选到的差异 DMR 较少，特异性差，研究针对性弱。若选择血液样本进行甲基化研究，患者及健康人样本均需要选取血液样本时，不建议将其与组织样本进行对照研究

1.3 细胞样本

（1）细胞样本不低于>5*10⁸个

1.4 核酸样本

浓度>24ng/μl ，体积在20μl~120μl，总量>2000ng。

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